Doofer Hund

Jetzt versuche ich schon seit Montag, "dog lysozyme" über die Säule zu jagen. Aber irgendwie will das Protein nicht. Letzte Woche haben wir das Experiment mit Lysozym vom Pferd recht erfolgreich hinbekommen - also Säulenchromatografie (Anionenaustauscher), Dialyse der vielversprechenden Fraktionen in 15 l Puffer (der mit Ammoniak eingestellt werden musste...hehe), Schockgefrieren in flüssigem Stickstoff, Lyophylisierung, alles wunderbar. Dieses komische Hundeenzym scheint nun aber nicht an meine Säule zu binden. Also das erste Mal schon, aber da war die Säule auch noch dreckig und es kam als der Komplex herunter, den wir erst im nächsten Experiment haben wollten. Und dann...nichts mehr. Nur doofe Luftblasen, die den wunderschönen, nichts sagenden Spektren noch das i-Tüpfelchen aufsetzen. Heute habe ich zumindest festgestellt, dass der pH-Wert nach dem Auflösen des Proteins um 0,5 sinkt...in dem Fall sogar kritisch. Also die Proteinlösung nochmal ganz ordentlich eingestellt...hat auch nicht geholfen. Morgen kriegt der Hund seine letzte Chance, indem ich den pH-Wert aller Puffer um 0,5 erhöhe. Das müsste doch echt ein paar negative Ladungen für die Chromatografie einbringen...